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    小鼠氫化可的松ELISA試劑盒使用說明書
    
        
    更新時間：2011-11-16    點擊次數(shù)：1845次
    
        
    本試劑僅供研究使用
     
    試驗原理：
            HYD試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知HYD濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將HYD和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中HYD的濃度呈比例關(guān)系。 
    試劑盒內(nèi)容及其配制：
                
                            
    試劑盒成份
                    		                        
    96孔配置
                    		                        
    48孔配置
                    		        
            
                            
    96/48人份酶標(biāo)板
                    		                        
    1塊板（96T）
                    		                        
    半塊板（48T）
                    		        
            
                            
    塑料膜板蓋
                    		                        
    1塊
                    		                        
    半塊
                    		        
            
                            
    標(biāo)準(zhǔn)品：240ng/ml   
                    		                        
    1瓶（1.0ml）
                    		                        
    1瓶（0.5ml）
                    		        
            
                            
    空白對照
                    		                        
    1瓶（1.0ml）
                    		                        
    1瓶（0.5ml）
                    		        
            
                            
    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液
                    		                        
    1瓶（8.0ml）
                    		                        
    1瓶（4.0ml）
                    		        
            
                            
    生物素標(biāo)記的抗HYD抗體
                    		                        
    1瓶（8.0ml）
                    		                        
    1瓶（4.0ml）
                    		        
            
                            
    親和鏈酶素-HRP
                    		                        
    1瓶（12ml）
                    		                        
    1瓶（5ml）
                    		        
            
                            
    洗滌緩沖液
                    		                        
    1瓶（20ml）
                    		                        
    1瓶（10ml）
                    		        
            
                            
    底物A
                    		                        
    1瓶（6.0ml）
                    		                        
    1瓶（3.0ml）
                    		        
            
                            
    底物B
                    		                        
    1瓶（6.0ml）
                    		                        
    1瓶（3.0ml）
                    		        
            
                            
    終止液
                    		                        
    1瓶（6.0ml）
                    		                        
    1瓶（3.0ml）
                    		        
        
     自備材料：
    1. 蒸餾水。
    2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
    3. 振蕩器及磁力攪拌器等。 
    樣品收集、處理及保存方法： 
    1、血清……操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
    2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
    3、 細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
     5、 保存……如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 
     ●   試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
    ●   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
    ●   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
    ●   使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
    ●   使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    ●   底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
    ●   加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
    ●   按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。 
    安全性： 
    1.   避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
    2.   實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    3.   不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。 
    試劑的準(zhǔn)備： 
    1.   標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
                
                            
    240
                
    ng/ml
                    		                        
    （6號標(biāo)準(zhǔn)品）
                    		                        
    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
                    		        
            
                            
    120
                
    ng/ml
                    		                        
    （5號標(biāo)準(zhǔn)品）
                    		                        
    100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                    		        
            
                            
    60
                
    ng/ml
                    		                        
    （4號標(biāo)準(zhǔn)品）
                    		                        
    100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                    		        
            
                            
    30
                
    ng/ml
                    		                        
    （3號標(biāo)準(zhǔn)品）
                    		                        
    100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                    		        
            
                            
    15
                
    ng/ml
                    		                        
    （2號標(biāo)準(zhǔn)品）
                    		                        
    100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                    		        
            
                            
    7.5
                
    ng/ml
                    		                        
    （1號標(biāo)準(zhǔn)品）
                    		                        
    100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                    		        
            
                            
    0
                
    ng/ml
                    		                        
    （空白對照）
                    		                        
    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
                    		        
        
     2.   洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。 
    試劑盒性能： 
    1.   靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
    2.   特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
    3.   重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。 
    1.   使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
    2.   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
    3.   加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
    4.   甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
    5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
    6.   甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
    7.   每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
    8.   取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
    9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。 
    結(jié) 果 判 斷 與 分 析： 
    1、 儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
    2、 以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的HYD標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的HYD含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
    3、 檢測值范圍： 0-240ng/ml
    4、 敏感度：0.1ng/ml
    
        
      
    
    
    
  
    

    

    






 

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