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    晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)檢測說明書

    更新時間:2013-07-11   點擊次數(shù):3015次

                                                  晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)檢測說明書

    越來越多的證據(jù)指出晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)修飾蛋白嚴(yán)重影響到老齡化人群的健康問題。AGEs是葡萄糖與自由的蛋白質(zhì)氨基基團(tuán)發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng)的終端不可逆代謝產(chǎn)物的總稱。其在人體內(nèi)的積累會引發(fā)組織或器官一系列的病理性變化,從而導(dǎo)致白內(nèi)障、阿爾茨海默氏病、骨關(guān)節(jié)炎、心功能不全等疾病發(fā)生。糖尿?。ǜ哐牵┎“l(fā)也與AGE在體內(nèi)積累速度加快有關(guān)。

    研究發(fā)現(xiàn)AGEs的來源主要是葡萄糖,還有二羰基化合物、短鏈還原糖和葡萄糖的其他代謝途徑。目前確定結(jié)構(gòu)屬于AGE的單體化合物有CML、CEL、Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin等,針對這些化合物和AGEs、AGE14生產(chǎn)的抗體大量應(yīng)用于生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,發(fā)表的相關(guān)論文一一都證實了AGEs是老化、與老化相關(guān)的慢性疾病發(fā)生的重要影響因素。

     

    上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)試劑盒*,提供技術(shù)指導(dǎo)。您的咨詢與訂購,:   手機(jī)    :何

     

       

    葡萄糖來源的AGEs Glc-AGEsELISA試劑盒利用的是基于三明治原理的固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。如右圖所示,96孔板的表面有一層單克隆抗體涂層可直接識別樣品中Glc-AGEs的特異性抗原位點, 然后使用HRP標(biāo)記的anti-AGE抗體結(jié)合Glc-AGEs形成三明治復(fù)合物,zui后酶顯色對樣品進(jìn)行定性和定量研究。

       

    人或其他動物的純化蛋白、血漿、血清和細(xì)胞裂解液。

        

    (1) Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

    (2) Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2

    (3) Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

    (4) HRP- anti AGEs antibody concentrate(×100), 60 uL×1 (mouse monoclonal antibody)

    (5) OPD (o-phenylendiamine) tablets, 2 tab.

    (6) Substrate solution, 30 mL×1

    (7) Stop solution, 15 mL×1

    (8) Wash buffer concentrate (×20) , 30 mL×1

    (9) Dilution plate, 1 plate

      準(zhǔn) 

     

     

     

     

        

    使用前確保wash buffer濃縮液內(nèi)無結(jié)晶顆粒,往30 ml的濃縮液內(nèi)加入570 ml去離子水即為工作液,此溶液可以保存在2-8zui多放14天。

    抗體稀釋液

    10倍體積的清洗液稀釋"Reference standard and sample diluent"即可。

    標(biāo) 準(zhǔn)  

    用等體積"Reference standard and sample diluent" 稀釋"Glucose-derived AGEs standard"500ng/ml),如下圖所示,依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。

    HRP標(biāo)記-AGEs

    抗體(100×

    5 ml 的抗體稀釋溶液稀釋50ul HRP-anti AGEs antibody濃縮液,稀釋后的抗體不能保存。

        

    在使用前加1OPD tablet13 ml 底物溶液即可,此溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

    待測樣品的準(zhǔn)備

    "Reference standard and sample diluent"稀釋樣品,若樣品濃度非常高,需用PBS進(jìn)行預(yù)稀釋,zui后再調(diào)整濃度至100×或更高。

     

      準(zhǔn) 

    1

    96孔板準(zhǔn)備

    加入300 ul的清洗液至每個孔內(nèi),溫育30 min;*倒掉孔內(nèi)溶液后,再加入300ul 清洗液。再重復(fù)此步2次。

    2

       應(yīng)

    50 ul/的量加入標(biāo)準(zhǔn)溶液、稀釋樣品孵育1 hour,可以做兩個平行。孵育完成后吸去反應(yīng)液,用300 ul清洗液清洗3次。

    3

       應(yīng)

    50 ul/孔的100倍稀釋的HRP- anti AGEs antibody,孵育1 hour。孵育完成后吸去反應(yīng)液,用300 ul清洗液清洗3次。

    4

           

    100 ul/顯色液,孵育10 min

    5

       應(yīng)

    100ul/孔終止液終止酶顯色反應(yīng);

    6

    讀取吸光度

    酶標(biāo)儀在490 nm下讀取吸光值;

    7

      結(jié) 

    使用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出AGEs的濃度,使用4-Parameter Logistic Model分析數(shù)據(jù)。

     

    聯(lián)