ELISA實(shí)驗(yàn)是一種簡(jiǎn)易操作，敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。在我們國(guó)家的科研單位、高校、醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)用的比較成熟。

一、操作要求

    1.按說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。

　　2.ELISA試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。

　　3.自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。

　　4.從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。

　　5.試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。

Human factor BF ELISA KIT是*科研界較認(rèn)可的檢測(cè)方式，中文名稱(chēng)：人因子(BF)ELISA試劑盒  ，試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

二、操作方法

    各種類(lèi)型ELISA測(cè)定時(shí)一般需經(jīng)過(guò)這些步驟：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。

    1.重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與*次接近。

    2.加樣后在混勻器上充分混勻。

三、ELISA結(jié)果處理

    1.ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。

　　2.平均OD值減去空白孔的OD值。

　　3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

　　以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來(lái)作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線(xiàn)、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線(xiàn)是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線(xiàn)。

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